Label-free定量蛋白质组-蛋白与代谢组学_单细胞空间组学_分子生物_武汉世博宁康科技有限公司

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Label-free定量蛋白质组

所属分类：

蛋白组与代谢组学服务

非标记定量蛋白质组学技术(Label free)是近年来重要的质谱定量方法，用来比较的样品无需昂贵的稳定同位素标签做标记，提取的蛋白直接酶解后经过质谱分析产生数据。通过软件对大规模的谱图进行归一化后，比较对应的质谱峰的强度，峰面积等一系列因素，来确定蛋白质在几组样本中的相对表达量变化。样品类型：常规样本（如模式动植物组织、器官、细胞、单一菌体等样本）血清、血浆、脑脊液等需高丰度蛋白去除其它样本（如亚细胞器、外泌体、珍珠粉、骨组织等样本）

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服务介绍

产品简介

Label-free，又称非标记定量蛋白质组学检测技术，是对每个样本单独进行蛋白提取，酶解和上机检测。其无需使用昂贵的同位素做内标，只需分析大规模鉴定蛋白质时所产生的质谱数据，通过比较不同样品中相应肽段的信号强度，从而实现肽段以及对应蛋白质的相对定量。目前有3D label-free和4D label-free两种检测技术。3D label-free 采用的是美国 thermo公司的QE系列质谱仪，是最经典的蛋白质组学检测质谱仪，其肽段上机量比较高(可以达到1~5ug 肽段)。4D label-free用的是德国布鲁克公司的TIMS TOF质谱仪。和经典的3D技术相比，4D质谱的质量分析器前增加了一个离子淌度，该离子淌度可以根据肽段的截面积进行再次的分离和聚集，从而提高质谱仪肽段的检测能力。4D质谱仪肽段上样量一般也比较低，通常在100-200ng肽段。

技术原理

Label-free技术的定性是根据肽段母离子及二级的碎片离子的分子量与理论肽段的匹配打分实现。其定量原理是根据一级质谱相关的肽段峰强度(Massspectralpeakintensity)、峰面积(Peak area)、液相色谱保留时间(LCretention time)等信息,基于肽段母离子在其色谱保留时间内积分出来的峰面积进行定量，即是以MS1为基础进行定量。

技术特征

不需要昂贵的标记，操作简单根据一级质谱的峰面积进行蛋白定量，不需要同位素标记，实验耗费低。对样本的操作少，从而使其最接近原始状态，所需样本量低。

2.实验要求高，每一个样本单独提取、酶解和质谱检测，对液相色谱分离及串联质谱鉴定的稳定性和重复性要求较高。

3.样品不受限制，技术应用范围广泛，可进行检测灵敏度范围内的有无蛋白差异分析(非绝对有无)即仅在一组样本中有该蛋白表达，另一组样本中不能检测到该蛋白表达的情况。

技术路线